CAR - T细胞靶向淋巴细胞恶性肿瘤中的CD47。

作者：小编更新时间：2023-12-20 点击数：

靶向CD19的嵌合抗原受体(CAR) T细胞在治疗复发和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)方面取得了重大进展，但是仍有患者会复发。这些复发中近三分之一与CD19抗原丢失逃逸有关，因此利用替代CAR靶点可能会改善结果。

CD47是一种抗吞噬的“不要吃我”受体，已知在NHL中过度表达，是一个理想的CAR靶点，因为它对肿瘤进展可能是不可或缺的。

CD47- CAR结合域被设计为骆驼单变重链纳米体(CD47- vhh - CAR)或同源受体SIRPα的CD47结合域(SIRPα- CAR)，每个结合域与两个突变ITAMs (1XX)结合CD28共刺激结构域和CD3ζ激活结构域。用淋巴样小鼠肿瘤细胞系BM185和A20进行体外共培养试验。在体内实验中，对同基因BALB/c小鼠进行亚致死照射以进行淋巴细胞清除，然后静脉注射1x105荧光素酶BM185细胞。2天后，给小鼠注射2x10+6 CAR- T细胞，通过生物发光成像监测肿瘤进展。在生物定位实验中，CAR- T细胞与编码荧光素酶的单独载体共转导。

结果:CD47- CAR-T细胞在体外扩增过程中受到杀兄弟效应的阻碍，可通过敲除CD47 CRISPR来挽救。CD47-VHH-CAR和SIRPa-CAR T细胞对BM185和A20细胞的体外裂解均表现出强效和特异性。CD47-VHH-CAR- T细胞表现出短暂的抗白血病活性，但存活时间没有明显延长。T细胞生物定位分析显示，与CD19-CAR- T细胞相比，CD47- vhh-CAR-T细胞在胸腔中停留时间较长，骨髓运输较少，提示CD47抗原特异性肺隔离和低度扩张。SIRPα-CAR-T细胞分泌促炎细胞因子IL-18，显著改善CAR-T细胞扩增，导致骨髓运输和BM185肿瘤清除。然而，分泌il -18的SIRPa-CAR-T细胞的受体经历了致命的CAR-T细胞相关毒性。为了提高CD47-CAR T细胞的安全性，我们设计了一种NFAT应答载体，表达大肠杆菌衍生的二氢叶酸还原酶药物不稳定结构域修饰的CD47-CAR，以限制CD47-CAR在暴露于稳定抗生素甲氧苄啶并从CD19-CAR接收许可NFAT信号的T细胞中的表达。